Detection of C-reactive protein using functionalized gold nanoparticles

• Autor(a) principal: António, Maria de Almeida Vasconcelos
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22538
• topic: Biotecnologia; Nanopartículas; Doenças cardiovasculares; Proteína C-reactiva

Este projeto teve como objetivo desenvolver novas estratégias para funcionalizar nanopartículas de ouro (Au NPs) de forma a detetar a proteína C-reativa (CRP). Assim, foram sintetizadas nanopartículas de ouro esféricas com tamanhos médios de aproximadamente 10 e 40 nm. Posteriormente, a superfície das Au NPs foi modificada utilizando duas abordagens diferentes. Na primeira abordagem as Au NPs estabilizadas com citrato foram funcionalizadas com grupos ácidos carboxílicos pela modificação da superfície com os ligandos: ácido 11-mercaptoundecanóico (MUDA) e ácido mercaptopropiónico (MPA). Posteriormente a citidina difosfocolina (CDP) foi acoplada covalentemente à superfície das Au NPs utilizando 1-etil-3-(3’- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) para promover a reação. Na segunda abordagem as Au NPs estabilizadas com citrato foram modificadas com um aptâmero específico para a CRP. Estes materiais foram caracterizados utilizando diversas técnicas de análise nomeadamente espectroscopia de UVvis e de infravermelho (FTIR), medidas de potencial Zeta e de diâmetro hidrodinâmico e microscopia eletrónica de transmissão (TEM). Amostras selecionadas de Au NPs modificadas com aptâmero (Au NPs@ssDNA+NaCl+KCl) e de Au NPs bioconjugadas com CDP (Au NPs@MUDA@CDP_40nm e Au NPs@MPA@CDP_10nm) foram utilizadas para o estudo da deteção da proteína: CRP. As Au NPs foram adicionadas a soluções de concentração conhecida (10 - 100 nM). A deteção da CRP foi investigada através da aquisição de espectros de UV-vis. O aumento da razão de agregação, isto é entre a absorvância a 620 nm e a absorvância da banda de ressonância de plasmão de superfície localizada (A620/ALSPR), foi monitorizada ao longo do tempo, indiciando a deteção da CRP para todas as amostras testadas. Para os sistemas Au NPs@MUDA@CDP_40nm e Au NPs@ssDNA+NaCl+KCl foi possível correlacionar a razão A620/ALSPR com a concentração da CRP através de uma relação linear nas gamas de concentração de 20 - 50 nM (R2=0.9425) e de, 20 - 45 nM (R2=0.9382) respetivamente. Os resultados obtidos, embora preliminares, são promissores sendo necessário avaliar em estudos futuros aspetos tais como reprodutibilidade e interferência de outras proteínas em estudos futuros, tendo em vista o desenvolvimento de biossensores válidos para a deteção de CRP