Avalia????o da capacidade angiog??nica da linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Título da fonte: | Repositório Institucional do IPEN |
Texto Completo: | http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/32705 |
Resumo: | O carcinoma de c??lulas renais (CCR) ?? o c??ncer epitelial renal adulto mais comum, sendo respons??vel por mais de 90% de todas as neoplasias renais. O subtipo mais frequente de CCR ?? o de c??lulas claras (CCRcc). A maioria dos pacientes com CCRcc possui muta????o no gene supressor tumoral de Von Hippel-Lindau (VHL). O gene VHL codifica uma prote??na, a VHL, que ?? capaz de regular negativamente uma s??rie de prote??nas intracelulares, dentre elas o fator induz??vel por hip??xia (HIF). Muitas mol??culas t??m sido apontadas como respons??veis pelo fen??tipo agressivo desse tumor, uma delas ?? o fator de transcri????o NF-kB, que ?? o nome coletivo para os fatores de transcri????o da fam??lia Rel. Em mam??feros s??o conhecidos cinco membros desta fam??lia: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-kB1 (p105/p50) e o NF-kB2 (p100/p52). No CCR, o aumento da atividade do NF-kB correlacionava-se com o aumento de marcadores de angiog??nese tais como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e Interleucina 6 (IL-6). Nos ??ltimos anos v??rios grupos t??m demonstrado o papel funcional do NF-kB1 na tumorigenicidade do CCR. Nesse projeto utilizamos a t??cnica CRISPR/Cas-9 para obten????o de uma linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1. Foi realizada a verifica????o do gene end??geno mais est??vel para condi????es de norm??xia e hip??xia. Foi feita a quantifica????o dos n??veis de VEGF e IL-6 em condi????o de norm??xia e hip??xia. A t??cnica CRISPR/Cas9 foi eficaz para obten????o de c??lulas 786-0 nocaute para NF-kB1 (p105/p50). Dentre os oito genes end??genos analisados, o TRFC foi o mais est??vel e, consequentemente, o mais adequado para estudos com as c??lulas 786-0 em hip??xia. A supress??o da express??o da p50 nos clones 786-0 sg1, 786-0 sg2 e 786-0 sg3 resultou na redu????o de VEGF e IL6 tanto em norm??xia quando em hip??xia. A redu????o do diferencial hip??xia/norm??xia demonstra uma altera????o na responsividade celular ?? hip??xia no que diz respeito ?? Il-6. A redu????o dos n??veis de IL-6, pode justificar a redu????o da MMP-9 e migra????o celular observados por nosso grupo. |
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Em mam??feros s??o conhecidos cinco membros desta fam??lia: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-kB1 (p105/p50) e o NF-kB2 (p100/p52). No CCR, o aumento da atividade do NF-kB correlacionava-se com o aumento de marcadores de angiog??nese tais como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e Interleucina 6 (IL-6). Nos ??ltimos anos v??rios grupos t??m demonstrado o papel funcional do NF-kB1 na tumorigenicidade do CCR. Nesse projeto utilizamos a t??cnica CRISPR/Cas-9 para obten????o de uma linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1. Foi realizada a verifica????o do gene end??geno mais est??vel para condi????es de norm??xia e hip??xia. Foi feita a quantifica????o dos n??veis de VEGF e IL-6 em condi????o de norm??xia e hip??xia. A t??cnica CRISPR/Cas9 foi eficaz para obten????o de c??lulas 786-0 nocaute para NF-kB1 (p105/p50). Dentre os oito genes end??genos analisados, o TRFC foi o mais est??vel e, consequentemente, o mais adequado para estudos com as c??lulas 786-0 em hip??xia. A supress??o da express??o da p50 nos clones 786-0 sg1, 786-0 sg2 e 786-0 sg3 resultou na redu????o de VEGF e IL6 tanto em norm??xia quando em hip??xia. A redu????o do diferencial hip??xia/norm??xia demonstra uma altera????o na responsividade celular ?? hip??xia no que diz respeito ?? Il-6. A redu????o dos n??veis de IL-6, pode justificar a redu????o da MMP-9 e migra????o celular observados por nosso grupo.Submitted by Pedro Silva Filho (pfsilva@ipen.br) on 2022-02-08T13:58:10Z No. of bitstreams: 0Made available in DSpace on 2022-02-08T13:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient??fico e Tecnol??gico (CNPq)Disserta????o (Mestrado em Tecnologia Nuclear)IPEN/DInstituto de Pesquisas Energ??ticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SPCNPq: 169843/2018-168neoplasmscarcinomaskidneysanoxiaanimal cellslymphokinesprotein engineeringangiogenesiscomparative evaluationsAvalia????o da capacidade angiog??nica da linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1Evaluation of angiogenic capacity of human adenocarcinoma cell line knockout for NF-kB1 proteininfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisNS??o Paulo14146600info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional do IPENinstname:Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN)instacron:IPEN28472SILVA, LUIZ F.T. da22-02https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-22102021-122216/pt-br.php14146SILVA, LUIZ F.T. da:14146:810:SLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748http://repositorio.ipen.br/bitstream/123456789/32705/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51123456789/327052022-04-01 15:31:37.834oai:repositorio.ipen.br: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Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ipen.br/oai/requestbibl@ipen.bropendoar:45102022-04-01T15:31:37Repositório Institucional do IPEN - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN)false |
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