Avalia????o da capacidade angiog??nica da linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1

• Autor(a) principal: SILVA, LUIZ F.T. da
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/32705
• topic: neoplasms; carcinomas; kidneys; anoxia; animal cells; lymphokines; protein engineering; angiogenesis; comparative evaluations

O carcinoma de c??lulas renais (CCR) ?? o c??ncer epitelial renal adulto mais comum, sendo respons??vel por mais de 90% de todas as neoplasias renais. O subtipo mais frequente de CCR ?? o de c??lulas claras (CCRcc). A maioria dos pacientes com CCRcc possui muta????o no gene supressor tumoral de Von Hippel-Lindau (VHL). O gene VHL codifica uma prote??na, a VHL, que ?? capaz de regular negativamente uma s??rie de prote??nas intracelulares, dentre elas o fator induz??vel por hip??xia (HIF). Muitas mol??culas t??m sido apontadas como respons??veis pelo fen??tipo agressivo desse tumor, uma delas ?? o fator de transcri????o NF-kB, que ?? o nome coletivo para os fatores de transcri????o da fam??lia Rel. Em mam??feros s??o conhecidos cinco membros desta fam??lia: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-kB1 (p105/p50) e o NF-kB2 (p100/p52). No CCR, o aumento da atividade do NF-kB correlacionava-se com o aumento de marcadores de angiog??nese tais como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e Interleucina 6 (IL-6). Nos ??ltimos anos v??rios grupos t??m demonstrado o papel funcional do NF-kB1 na tumorigenicidade do CCR. Nesse projeto utilizamos a t??cnica CRISPR/Cas-9 para obten????o de uma linhagem celular de adenocarcinoma renal humano knockout para a prote??na NF-kB1. Foi realizada a verifica????o do gene end??geno mais est??vel para condi????es de norm??xia e hip??xia. Foi feita a quantifica????o dos n??veis de VEGF e IL-6 em condi????o de norm??xia e hip??xia. A t??cnica CRISPR/Cas9 foi eficaz para obten????o de c??lulas 786-0 nocaute para NF-kB1 (p105/p50). Dentre os oito genes end??genos analisados, o TRFC foi o mais est??vel e, consequentemente, o mais adequado para estudos com as c??lulas 786-0 em hip??xia. A supress??o da express??o da p50 nos clones 786-0 sg1, 786-0 sg2 e 786-0 sg3 resultou na redu????o de VEGF e IL6 tanto em norm??xia quando em hip??xia. A redu????o do diferencial hip??xia/norm??xia demonstra uma altera????o na responsividade celular ?? hip??xia no que diz respeito ?? Il-6. A redu????o dos n??veis de IL-6, pode justificar a redu????o da MMP-9 e migra????o celular observados por nosso grupo.